AAV/LVV为载体的眼用注射液的不溶性微粒检查

腺病毒相关病毒（adeno-associated virus，AAV）是一类单链线状DNA缺陷型病毒，有多种血清型，且不同血清型的AAV具有不同的组织器官靶向性。通过修饰、突变AAV的外壳蛋白序列产生新的组织倾向性的血清型。安全性高、可长期表达，治疗效果持久，且易于纯化，被视为最有前途的基因转移载体之一，在世界范围内的基因治疗和疫苗研究中得到广泛应用。全球已有多个基因治疗产品上市。

慢病毒载体（Lentivirus, LV）是细胞和基因疗法常用的递送载体之一，它的主要功能是将目的基因转移并整合到宿主细胞的基因组中，可以用来研究基因水平上的生物学调控机制。作为一种宿主范围很广的病毒载体，它们能够转导分裂和非分裂细胞，例如神经元、造血干细胞和免疫细胞，尤其是T细胞。近年来，慢病毒转导技术已经成功应用于CAR-T细胞的制备。

随着AAV和LVV相关载药技术的不断进步，其相关制剂的不溶性微粒检查也受到越来越多的关注，特别是基于AAV和LVV载药技术的眼用注射液。眼用注射液作为眼用制剂的重要方面，其不溶性微粒检查主要是参照USP789 眼用溶液的标准。

USP789关于不溶性微粒的检查规定了两种方法，第一种是光阻法，第二种是显微计数法，但是两种方法的判定标准是一致的，具体详见下图：

本文将通过一款特殊的LVV眼用注射液对比两种方法的一个差别：

样品信息如下：

光阻法-不溶性微粒测试结果如下图所示：

由上图可以看出，大于等于10μm以上的微粒为929.67个/ml，大于等于25μm以上的微粒为40.67个/ml，大于等于50μm以上的微粒为0个/ml，根据USP789光阻法判定标准，判定样品不符合检查的规定。

显微计数法-不溶性微粒测试结果如下图所示：

由上图可以看出，大于等于10μm以上的微粒为9个/ml，大于等于25μm以上的微粒为3个/ml，大于等于50μm以上的微粒为2个/ml，根据USP789显微计数法判定标准，判定样品符合检查的规定。

结论：

两种不同的方法，测试结果确实有非常大的差别，主要原因是：

1 一般眼用注射液相关制剂装量都比较少，要满足光阻法的检查一般需要混合多支进行检查，或者进行稀释进行检查，无论哪种方法，在制样的过程中容易产生气泡，加上体系本身少量的硅油会被当成微粒，造成很多假性的结果，因此导致样品测试结果不合格；

2 显微计数法跟光阻法相比，是整支全部进行检查，不需要考虑装量的影响，制备样品的过程中，同时可以去除气泡和硅油等的影响，反映体系真实的不溶性微粒结果；同时可以通过观察不溶性微粒的形貌去溯源不溶性微粒的来源，改善产品工艺，提高产品质量。

下图为LVV眼用制剂中的一些特征不溶性微粒图片：

检查仪器如下图所示：

胤煌科技(YinHuang Technology)是一家专注于为医药、半导体及化工材料等行业提供检测分析设备及技术服务的高科技公司，致力于为客户提供全面、准确的检测分析和解决方案。主营产品包括不溶性微粒分析仪，可见异物检查分析仪，原液粒度及Zeta电位分析仪，CHDF高精度纳米粒度仪，高分辨纳米粒度仪，溶液颜色测定仪，澄清度测定仪等，公司自主研发的YH-MIP系列显微计数法不溶性微粒仪、YH-FIPS系列流式动态图像法粒度仪，YH-FIPS系列微流成像颗粒分析仪已经在生物医药、半导体及材料化工领域得到广泛应用。